تبلیغات
Knowledge of the world of plant physiology - کلونینگ
 
درباره وبلاگ
جستجو

آمار وبلاگ
  • کل بازدید :
  • بازدید امروز :
  • بازدید دیروز :
  • بازدید این ماه :
  • بازدید ماه قبل :
  • تعداد نویسندگان :
  • تعداد کل پست ها :
  • آخرین بازدید :
  • آخرین بروز رسانی :
Knowledge of the world of plant physiology






کلونینگ ( Cloning )

 

برای اتصال دو DNA به یکدیگر در آزمایشگاه از آنزیم  DNA ligase  استفاده میشود DNA ligase  آنزیمی است که بین دو نوکلئوتید  اتصال  فسفودی استر ایجاد میکند. دو نوع DNA ligase  وجود دارد یکی T4 DNA ligase  که از فاژ T4  استخراج میشود  وانرژی لازم برای فعالیت خود را از  ATP تامین میکند این آنزیم دوانتهای blunt  وهمچنین دوانتهای  Cohesive را بهم متصل کند( اتصال فسفودی استر ایجاد میکند). دیگری  DNA ligase  باکتری E.coli  که انرژی لازم برای فعالیت خودراازNAD بدست می آورد  و بیشتر برای اتصال انتهاهای Cohesive  استفاده میشود.

 آنزیمها ی مورد استفاده درمهندسی ژنتیک 

آنزیم هاابزار کار مهندسی ژنتیک در آزمایشگاه میباشند و مخقق بدون آنها نمیتواند کاری انجام دهد. در این درس با انواع آنزیمها و طرز کار آنها آشناشده و مورد استفاده هر کدام را بررسی میکنیم.

الف )  لیگازها :

این آنزیمها اتصال فسفو دی استر بین تک رشته ها را روی رشته  DNA  تک رشته ای بر قرار میکند. 5`-p  یک رشته به 3`-OH   رشته دیگر متصل  میشود.. کو فاکتور آنها ATP یا NAD است .

1-  آنزیم  DNA ligase : این آنزیم  از باکتری E.coli   استخراج می شود وکوفاکتور آن NAD است و اکثرا" اتصال  بین دو DNA که  برش انتهایی ا نها بصورت  Cohesive  باشد  را بر قرار میکند و عده ای معتقدند که این آنزیم در فر قرار کردن اتصال بین دو  DNA  که  برش انتهایی آنها بصورت blunt   باشد مشکل خواهد داشت .

 2- آنزیم  T4 DNA ligase : این آنزیم از فاژ T4  استخراج میشود وکوفاکتور آن ATP است . این آنزیم  اتصال هر دو انتهای Cohesive  و blunt  را بر قرارمیکند.

 3- آنزیم  T4 RNA ligase : این آنزیم اتصال فسفو دی استربین 3`- OH  و  5`-P  مولکولهای RNA  را بر قرار میکند . کوفاکتور آن ATP و Mg2+ است

ب)  نوکلئاز ها :

این آنزیم ها  نوکلئو تید هار ا تجزیه میکنند.

4- آنزیم  DNase I  : یک اندو نوکلئاز است و dsDNA را به روش غیر اختصاصی تجزیه میکند . کوفاکتور آن  Mg2+ ، +  Ca2  و Mn2+  است .. این آنزیم برای مقا صد زیر استفاده میشود:

- تجزیه غیر اختصاصی DNA 

-  نشاندار کردن DNA

- ایجاد موتاسیون در ژن

5-   نوکلئاز استافیلوکوکی : DNA  و RNA  را به روش غیر اختصاصی تجزیه میکند.

6- انزیم   RNase A-  این آنزیم RNA  تک رشته ای را هیدرولیز میکند.

 7- آنزیم RNase H - این آنزیم RNA  را که با DNA دوبلکس  شده باشد  راهیدرولیزمیکند و در سنتز   رشته  دوم cDNA  کاربرد دارد.

8-  آنزیم  S1 Nuclease  : این آنزیم پلی نوکلئو تید تک رشته ای را هیدرولیز میکند.

 

 

9- آنزیم  Mong bean Nuclease – این آنزیم شبیه  S1 Nuclease  عمل میکند

10- آنزیم  Exonuclease III    (گزو نوکلئاز :  (3`→ 5   فعالیت 3`  فسفاتاز دارد

همچنین فعالیت شبیه RNase H  هم دارددارد.

این آنزیم اتصال فسفودی استرجایگاههای آپورینی یا آپیریمیدینی را تجزیه میکند

11- آنزیم  Bal1 Nuclease : این آنزیم ssDNA  را به روش اگزو نوکلئازی یا اندو نوکلئازی تجزیه میکند





نوع مطلب :
برچسب ها :
لینک های مرتبط :


چهارشنبه 24 اردیبهشت 1393 :: نویسنده : مهــشیــد آقــایـــی زاد
نظرات ()
سه شنبه 17 مرداد 1396 04:44 ب.ظ
Hi superb blog! Does running a blog like this require a great deal of work?
I've no expertise in coding however I had been hoping to start
my own blog soon. Anyway, should you have any recommendations or techniques for new blog owners please
share. I know this is off topic nevertheless I simply had to ask.
Thank you!
جمعه 13 مرداد 1396 01:22 ب.ظ
Howdy would you mind stating which blog platform you're working with?

I'm going to start my own blog in the near future but I'm having a tough
time selecting between BlogEngine/Wordpress/B2evolution and Drupal.
The reason I ask is because your design seems different then most blogs and I'm looking
for something unique. P.S Apologies for being
off-topic but I had to ask!
یکشنبه 8 مرداد 1396 12:25 ق.ظ
I am actually glad to read this blog posts which contains tons of useful information, thanks for providing these
kinds of statistics.
 
لبخندناراحتچشمک
نیشخندبغلسوال
قلبخجالتزبان
ماچتعجبعصبانی
عینکشیطانگریه
خندهقهقههخداحافظ
سبزقهرهورا
دستگلتفکر